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瓊脂糖凝膠4B是用4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒,作為凝膠層析介質(zhì)使用。
1. 外觀 本品為乳白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。
2. 包裝 產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝,外貼標簽,注明“品名、體積、顆粒大小、” 等內(nèi)容。
3. 貯存 產(chǎn)品應密封貯存在4℃~25℃(保存溶液為20% 乙醇),通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇。
4. 注意事項 本品應避免與氧化劑接觸,避免長時間暴露在空氣中
5.運輸 運輸中應避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。
6.保質(zhì)期 5年。
7.應用 本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì),非特異性吸附低,回收率高,可多次重復使用等特點,用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。
7.1 裝柱 凝膠過濾介質(zhì)的使用對裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。
以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊,接好管路。
⑴讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
⑵選擇一根一定直徑的柱子,長約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。勻漿作脫氣處理。不要劇烈攪動,以免攪壞微球。
⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無氣泡。
⑷ 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑸ 打開蠕動泵,讓緩沖液緩慢流過,使柱床穩(wěn)定。
⑹用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。
7.2平衡 讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。
7.3上樣
⑴樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理,再上樣。
⑵介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的,分子量大的先流出來。
⑶上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。
7.4洗脫 用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
7.5再生 一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。
7.6注意:在裝柱、使用和保存柱子的時候,始終要避免柱子流干氣泡進入
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