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上海玉博生物科技有限公司
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染-脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染（Lipofetmiane 2000）2011/06/23
1、轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的處理（以24孔板培養(yǎng)為例）：貼壁細(xì)胞：在轉(zhuǎn)染前一天，在24孔板內(nèi)鋪上0.5×105細(xì)胞，500ul無抗生素培養(yǎng)基培養(yǎng)一天，到轉(zhuǎn)染時使細(xì)胞達(dá)到80％～90％的匯合率。懸浮細(xì)胞:在制備混合物前，將4—8×105細(xì)胞用無抗生素培養(yǎng)基培養(yǎng)鋪鋪于24孔板內(nèi)。2、轉(zhuǎn)染方法（以質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染為例）2.1、將DNA質(zhì)粒溶于50ul無血清的Opti－MEMⅠReducedSerumMedium中。混合均勻。2.2、將適量Lipofectamine2000溶于50ul無血清的Opti－MEMⅠ中，混
免疫組化中常見問題2011/06/22
1、石蠟切片和冰凍切片的比較？（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片。因?yàn)樽魇炃衅瑫r要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。（2）冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復(fù)這一步。缺點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，可能會使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當(dāng)你買一抗時，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫著兩者都可，那就都能做。（3）石
Western Blot常見問題及處理2011/06/10
1、westernblot的優(yōu)點(diǎn)答：靈敏，可達(dá)ng級，用Ecl顯色法理論上可達(dá)pg級。方便，特異性高。2、為什么我的細(xì)胞提取液中沒有目標(biāo)蛋白？答：原因有很多:a）你的細(xì)胞中不表達(dá)這種蛋白質(zhì)，換一種細(xì)胞；b）你的細(xì)胞中的蛋白質(zhì)被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c）你的抗體不能識別目標(biāo)蛋白，多看看說明，看是否有問題。3、我的細(xì)胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢？答：a）有沉淀可能因?yàn)槟愕牡鞍讻]有變性*，可以適當(dāng)提高SDS濃度，同時將樣品煮沸時間延長，b）也不排除你的抗原濃度過高，
血清的保存及使用注意事項(xiàng)2011/06/09
血清是細(xì)胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。在實(shí)驗(yàn)室操作中要注意及處理方法：1.血清保存:建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2.解凍血清的方法:建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成
DNA純化和濃縮新方法:超濾2011/06/03
AmiconUltra-0.5mLCentrifugalFiltersforDNAPurificationａndConcentration操作示意圖：Withtheirverticalmembranedesign,AmiconUltra0.5mLfiltersdelivergreatperformanceａndlowerspintimesConcentrates500µLdownto15µLConcentrationfactor25xto30xHighsamplerecovery（greater
NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞溶解作用的研究2011/05/31
前言自然殺傷細(xì)胞（NatureKillerCells,NK）是骨髓衍化的淋巴細(xì)胞，其zui初通過巨大的顆粒性狀被識別。NK細(xì)胞能自發(fā)殺滅多種腫瘤細(xì)胞，同時還可保護(hù)正常的細(xì)胞，從而被認(rèn)為是癌癥的克星。zui重要的是，不管是在胞內(nèi)還是胞外，NK細(xì)胞不需要免疫接種或提前激活，就能夠自發(fā)溶解特定的腫瘤靶細(xì)胞，而T細(xì)胞必須要通過抗原遞呈細(xì)胞的協(xié)助才能發(fā)揮作用。許多胞內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)表明,除了外滲出和滲入腫瘤組織的能力外，NK細(xì)胞還有望具有抗腫瘤的能力。研究發(fā)現(xiàn)缺失NK細(xì)胞的小鼠在致癌物誘下更容易發(fā)產(chǎn)生癌癥。另外
FuGENE HD Transfection Reagent2010/11/24
ApplicationFuGENE®HDTransfectionReagentisanext-generationtransfectionreagent,freeofanimal-derivedcomponents.Itisdesignedtotransfectawiderangeofeukaryoticcellsincludinginsectcellsａndmanycelllinesnottransfectedwellbyotherreagents（e.g.,MCF-7,RAW264.7,PC
FuGENE HD轉(zhuǎn)染試劑2010/11/24
RocheFuGENEHDTransfectionApplicationFuGENE®HDTransfectionReagentisanext-generationtransfectionreagent,freeofanimal-derivedcomponents.Itisdesignedtotransfectawiderangeofeukaryoticcellsincludinginsectcellsａndmanycelllinesnottransfectedwellbyotherreagen
流式細(xì)胞技術(shù)檢測法2010/11/24
1.3流式細(xì)胞技術(shù)檢測法原理：包繞著鞘液的單細(xì)胞或微粒經(jīng)過流式細(xì)胞儀檢測區(qū)域時被激發(fā)光激發(fā)出熒光信號，形成的不同波長熒光信號被光電倍增管接收后轉(zhuǎn)換為電信號并進(jìn)一步轉(zhuǎn)換成計(jì)算機(jī)可識別的數(shù)字信號。其應(yīng)用范圍廣泛，常用于細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、血液學(xué)等領(lǐng)域。應(yīng)用：1）了解細(xì)胞大小及顆粒度2）細(xì)胞狀態(tài)：pH值、氧化還原、氧自由基、Ca2+3）細(xì)胞表面蛋白：CD系列等4）細(xì)胞內(nèi)蛋白：胞內(nèi)因子、P53等5）細(xì)胞功能檢測：細(xì)胞周期、凋亡、分化、細(xì)胞增殖活力、吞噬功能、藥物泵的功能7）免疫表型分
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建2010/11/24
1.2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建原理：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，就是轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因及蛋白。需要在瞬時轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選或者應(yīng)用高轉(zhuǎn)染效率的病毒，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進(jìn)行細(xì)胞傳代，從而得到可穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞系。應(yīng)用：觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能（穩(wěn)定，可長期進(jìn)行研究）一般流程：1）篩選濃度測定：以10~14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度2）細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生
Cell cycle analysis of Escherichia coli cells2010/10/20
CellcycleanalysisofEscherichiacolicellsCellcycleanalysisofEscherichiacolicellsCperiod=thetimeforaroundofchromosomereplicationDperiod=thetimebetweentheendofaroundofchromosomereplicationａndcelldivisionDeterminationofinitiationage（ai）ａndC+D:Fromflowcyto
Preparing chemically competent cells2010/10/20
PreparingchemicallycompetentcellsMaterialsPlateofcellstobemadecompetentTSSbufferLBmediaIceGlassware&EquipmentFalcontubes500μlEppendorftubes,onice200mlconicalflask200μlpipetmanorrepeatingpipettor5mlpipettePreparationGrowa5mlovernightcultureofcellsinLB
*0 chemically competent cells2010/10/20
*0chemicallycompetentcellsOverviewThisprotocolisavariantoftheHanahanprotocol[1]usingCCMB80bufferforDH10B,*0ａndMachIstrains.ItbuildsonExample2oftheBloom05patentaswell.Thisprotocolhasbeentestedon*0,MachIａndBL21（DE3）cells.SeeBacterialTransformationforam
Transforming chemically competent cells2010/10/20
TransformingchemicallycompetentcellsMethodThawTSScellsonice.AddDNA,pipettegentlytomix（1μlofpreppedplasmidismorethanenough）.Note:Ifyouareaddingsmallvolumes（~1μl）,becarefultomixtheculturewell.Dilutingtheplasmidbackintoalargervolumecanalsohelp.Letsitfor
Belcher/Knight: Electrocompetent Cells2010/10/20
SaponinLysisofRBCsElectrocompetentCellsFromDanijelaDukovskiatHarvardMedicalSchool.Thisprotocolworkswell.--JulieNorvilleMaterialsDIwater10%GlycerolSpecialEquipmentCentrifugeIcewaterbathLiquidnitrogenMethodGrow500mlculturetoOD0.5（approximay）.Spindownce
Saponin Lysis of RBCs2010/10/20
SaponinLysisofRBCsCuratorsJingyangChen,SeattleBiomedicalResearchInstitute,307WestlakeAveN,Suite500,Seattle,WA,98109,USA.jingyang.chen@Anyoneshouldfeelfreetoaddthemselvesasacuratorforthisconsensusprotocol.Youdonotneedtobeacuratorinordertocontribute.Th
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