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液相HPLC中常用的檢測器分有如下幾種，紫外吸收檢測器（UVD）、二極管陣列檢測器（PDAD）、熒光檢測器（FLD）、示差折光檢測器（RID）、蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）、質譜檢測器（MSD）等。小編這里重點介紹了實驗室常見的液相檢測器的原理，并對它們在實踐中的應用的優(yōu)缺點分別進行分析，供大家參考。

一、紫外吸收檢測器（UVD）

紫外吸收檢測器是應用比較多的檢測器，大部分的液相都會配有紫外檢測器，該檢測器也能對絕大部分的藥物有響應。通常分為兩類：可變波長檢測器和二極管陣列檢測器。

1、紫外檢測器原理

遵循的是朗伯比爾定律：當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時,其吸光度A與吸光物質的濃度c及吸收層厚度b成正比。如果厚度固定，公式可表示為A=kc。也就是說，理論上供試品的響應值與濃度做線性回歸的話，應該是一條經過原點的曲線。這就是含量測定外標法的理論依據(jù)。

但是實際上由于儀器的進樣誤差、人員操作誤差、流動相的本底吸收等因素的影響，線性不可能經過原點，線性方程中都有一個不是零的截距。這就是對照品濃度和供試品濃度應接近的原因，線性如果經過原點，任何對照品的濃度都可以用來測定供試品的結果。線性不經過原點，對照品濃度與供試品濃度相差越大，計算結果誤差越大。

由這個討論我們又扯出另一個話題，就是有關物質檢測項的自身對照溶液濃度應該是多少的問題。比如原料藥，有將供試品稀釋1000倍，有稀釋100倍的，到底哪個濃度合適？我想之前的討論可以給出一個合理的答案了，就是如果截距很小，二者區(qū)別不大，隨便那個濃度都可以。如果截距較大，則應選擇和雜質規(guī)定限度附件的濃度，一般是稀釋1000倍。較小或者較大怎么判斷，個人認為可以5%為分界線。當然，zui終還是看回收率的結果，能夠滿足回收率的要求就可以。

2、優(yōu)缺點

優(yōu)點很多，讓人印象深刻的就是憨厚，等度梯度緩沖鹽隨便用，好說話的一塌糊涂。還有就是供試品的量與響應者呈良好線性，方便計算檢測結果。另外適用范圍較廣，只要有紫外吸收的物質都可以應用。

缺點不多：一個是樣品必須有紫外吸收，另外一個就是對流動相有一定的要求，流動相的紫外吸收應盡可能的小，否則會有較大的本底吸收。本底吸收也是截距的一大來源，樣品的響應等于本身的吸收減去流動相本底吸收，如果本底吸收為固定值b的話，樣品在儀器上實際的響應者為A=kc-b。流動相的影響在有關物質檢測中較為明顯，因為雜質量小，響應弱，流動相的影響就較大，這個需要注意。就是說開發(fā)方法時檢測波長應盡可能大于流動相的截止波長。

二、熒光檢測器

熒光檢測器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器，可檢測能產生熒光的化合物。某些不發(fā)熒光的物質可通過化學衍生化生成熒光衍生物，再進行熒光檢測。其zui小檢測濃度可達0.1ng／ml，適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個數(shù)量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。

近年來，采用激光作為熒光檢測器的光源而產生的激光誘導熒光檢測器極大地增強了熒光檢測的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應用。

1、原理

化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光，稱為熒光；熒光強度 (F) 與激發(fā)光強度 (I0) 及熒光物質濃度 (C) 之間的關系為：F=2.3QKI0εCl；F=KC

Q為量子產率，K為熒光效率，ε為摩爾吸光系數(shù)，l為光徑長度。

從電子躍遷的角度來講，熒光是指某些物質吸收了與它本身特征頻率相同的光線以后，原子中的某些電子從基態(tài)中的zui低振動能級躍遷到較高的某些振動能級。電子在同類分子或其他分子中撞擊，消耗了相當?shù)哪芰?，從而下降?電子激發(fā)態(tài)中的zui低振動能級，能量的這種轉移形式稱為*躍遷。由zui低振動能級下降到基態(tài)中的某些不同能級，同時發(fā)出比原來吸收的頻率低、波長長的一種光，就是熒光。被化合物吸收的光稱為激發(fā)光，產生的熒光稱為發(fā)射光。熒光的波長總要長于分子吸收的紫外光波長，通常在可見光范圍內。熒光的性質與分子結構有密切關系，不同結構的分子被激發(fā)后，并不是都能發(fā)射熒光。。

2、優(yōu)缺點

熒光檢測器zui大的優(yōu)點是靈敏度非常高，可以達到ppt級別。缺點是適用范圍窄，僅適用于被激發(fā)后能產生熒光的物質，該缺點限制了熒光檢測器的應用。

三、示差折光檢測器RID

RID是一種通用檢測器，對所有樣品都有響應。

1、原理

示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。光從一種介質進入另一種介質時，由于兩種物質的折射率不同就會產生折射。只要樣品組分與流動相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內檢測器的輸出與溶質濃度成正比。

2、優(yōu)缺點

優(yōu)點是通用，沒有不能檢測的。

zui大缺點：靈敏度低，一般來說有關物質檢測不能用它，RID一般用于含量測定；另一個缺點由它的原理決定，只能等度，所以多組分的分離存在問題。還有平衡時間過長，對環(huán)境要求高（尤其是室溫的波動）也是讓操作人員困擾的因素。

四、電噴霧檢測器CAD

一種新型的通用檢測器，賽默飛公司出品，目前處于保護期間。靈敏度優(yōu)于ELSD。

1、原理

首先，檢測器將分析物轉化成溶質顆粒。顆粒的大小隨著被分析物的含量而增加。然后，溶質顆粒與帶正電荷的氮氣顆粒相撞，電荷隨之轉移到顆粒上 – 溶質顆粒越大，帶電越多。zui后，溶質顆粒把它們的電荷轉移給收集器，通過高靈敏度的靜電檢測計測出溶質顆粒的帶電量，由此產生的信號電流與溶質的含量成正比。

2、優(yōu)缺點

優(yōu)點同ELSD，但是靈敏度更高。賽默飛的宣傳中將其推崇的神乎其神，但是它也有但是。缺點也同ELSD，線性較差，但優(yōu)于ELSD。在全量程范圍內都是非線性響應，但CAD的重現(xiàn)性更好且在小濃度范圍內響應基本呈線性。CAD雖然將原理改為使顆粒帶電檢測收集的電信號，使得濃度與響應者在一定范圍內直接呈線性關系。但是顆粒的形成過程是一個非物質本身屬性決定的過程，也就意味著響應是不穩(wěn)定的。不同于紫外檢測器，紫外吸收是物質本身的屬性，不會更改，擁有良好的重現(xiàn)性。