最近幾年來，隨著活細(xì)胞體系單份子熒光成像技術(shù)的發(fā)展，膜蛋白單份子研究，特別是受體動力學(xué)的研究，已成為目前單份子研究領(lǐng)域中活躍的研究方向之1。近幾年發(fā)展起來的超分辨成像技術(shù)因其能夠突破光學(xué)衍射極限，而比傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡具有更高的分辨率和更高的定位精度。

英國Oxford Nanoimaging公司新推控制步驟可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求自由編輯;出的超分辨熒光顯微鏡Nanoimager，由牛津大學(xué)Achillefs Kapanidis教授團(tuán)隊(duì)經(jīng)過8年時間研發(fā)而成，是臺大視野單份子FRET顯微鏡，將以的分辨率在單份子示蹤、活細(xì)胞成像、蛋白互作、3D成像等研究領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

Nanoimager主要技術(shù)特點(diǎn)

橫向分辨率 20nm;縱向分辨率 50nm

穩(wěn) 下面本公司技術(shù)人員為大家介紹拉力機(jī)的功能特點(diǎn)和它的丈量原理定 性： 1 m/K的漂移; 1 nm 振幅

支持同時雙色成像溫柔序4色成像

采取1級激光，使用安全

Nanoimager采取PALM/dSTORM技術(shù)和光激活定位顯微技術(shù) ，利用單份子定位算法并結(jié)合光學(xué)系統(tǒng)艾里斑的形狀，以超高精度(納米量級)取得熒光份子的中心位置，然后用CCD將其信號進(jìn)行收集轉(zhuǎn)化終得到分辨率為20nm的超分辨圖象。

Nanoimager主要利用案例

1、單份子FRET

FRET是1種兩個熒光份子間非輻踩點(diǎn)、釘梢、運(yùn)輸、射性的能量轉(zhuǎn)移方式，反應(yīng)二者的份子間距(1般在2 10 nm的間距產(chǎn)生)。Nanoimager是世界臺用于大視野單份子熒光共振能量轉(zhuǎn)移的商業(yè)化儀器，其適用于smFRET的關(guān)鍵功能包括：同時雙色成像;單份子散射光強(qiáng)度和整體平均的實(shí)時分析;視野中數(shù)千個單份子的高通量成像，和用交替熒光激起 smFRET的功能來定量化學(xué)計(jì)量與FRET效力。圖2是smFRET用于研究單個DNA霍利迪交叉的動力學(xué)。

2、單份子示蹤

Nanoimager可以在兩個通道同時示蹤細(xì)胞或純化物樣品中的單份子 ，并計(jì)算分散系數(shù)。細(xì)胞中份子的分散系數(shù)可以被示蹤，如酶或蛋白可以通過藥物和抗生素的反應(yīng)來示蹤。低分散率可以表示標(biāo)記份子與另外一份子或結(jié)構(gòu)的相互作用或相結(jié)合。

Nanoimager可以直接反應(yīng)純化樣品中熒光粒子的分散率和預(yù)估大小，具有敏感性 和特異性 。

3、更大視野的成像

Nanoimager的每一個成像通道均有50 m x 80 m的大視野，且照明均勻，可以實(shí)現(xiàn)單份子或細(xì)胞的高通量成像并快速搜集數(shù)據(jù)。圖4顯示了以10倍于其他技術(shù)的速度對突變的大腸桿菌細(xì)胞的不同表型進(jìn)行成像。為了取得不同表型的可靠的結(jié)果，需要對大量細(xì)胞進(jìn)行比較。使用具有大視野，能夠自動對焦和自動獲得數(shù)據(jù)的智能化的3種基本配置：主機(jī)、微電腦、還有打印機(jī)Nanoimager可以顯著加快全部實(shí)驗(yàn)速度和通量。將大視野與超分辨成像結(jié)合是Nanoimager的優(yōu)勢。

編輯點(diǎn)評

超分辨熒光成像特指分辨率打破了光學(xué)顯微鏡分辨率極限(200nm)的顯微鏡，技術(shù)原理主要有受激起射消耗顯微鏡技術(shù)和光激活定位顯微鏡技術(shù)。超分辨熒光顯微鏡以其的優(yōu)勢，已成為生物醫(yī)學(xué)研究的重要工具。